一、PCR實(shí)驗室的設(shè)計原則

標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗室一般分為4個區(qū)域：一區(qū)為試劑準(zhǔn)備區(qū)，二區(qū)為標(biāo)本制備區(qū)，三區(qū)為PCR擴(kuò)增區(qū)，四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū)。

為避免交叉污染，進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。

二、PCR實(shí)驗室各分區(qū)介紹

2.1試劑準(zhǔn)備區(qū)（1區(qū)）

該實(shí)驗區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

房間的面積宜控制在15㎡~20㎡。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染。

2.2標(biāo)本制備區(qū)（2區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。

標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25㎡~30㎡之間。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

2.3 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)（3區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗室的核心儀器PCR儀，在實(shí)驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進(jìn)行。建議采用≥10Pa壓差，在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。

2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)（4區(qū)）

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測定。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。

在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥，保證房間內(nèi)的相對負(fù)壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

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